powrót do podstaw: pbr322 i systemy ekspresji białek w E. coli

szeroka różnorodność systemów ekspresji opartych na plazmidach w E. coli wynika z faktu, że nie ma jednej strategii osiągnięcia maksymalnej ekspresji każdego sklonowanego genu. Chociaż wdrożono szereg strategii w celu radzenia sobie z problemami związanymi z transkrypcją i translacją genów, fałdowaniem białek, sekrecją, lokalizacją, modyfikacjami posttranslacyjnymi, specyficznymi cechami różnych szczepów i tym podobnymi oraz bardziej zintegrowanymi procesami, podstawowe elementy przenoszone przez plazmid i ich interakcja z konkretnym szczepem gospodarza wpłynie na ogólny system ekspresji i końcową wydajność. Wektor plazmidowy pbr322 jest ugruntowanym wielozadaniowym wektorem klonującym w laboratoriach na całym świecie, a duża liczba pochodnych została stworzona do konkretnych zastosowań i celów badawczych, w tym ekspresji genów w jego naturalnym gospodarzu, E. coli i kilku innych bakteriach. Wczesna charakterystyka cząsteczki, w tym jej Sekwencja nukleotydowa, mechanizmy replikacji i utrzymania oraz określenie jej regionów kodujących, przyczyniły się do jej sukcesu, nie tylko jako uniwersalnego wektora klonującego, ale także jako dostawcy genów i źródła replikacji dla innych wektorów wewnątrzgatunkowych. Od czasu publikacji wyżej wymienionych recenzji, nowe odkrycia odnoszące się do tych zagadnień pojawiły się w literaturze, które pogłębiają zrozumienie cech, zachowania i wpływu plazmidu w systemach ekspresji genów, a także niektórych ważnych cech szczepu, które wpływają na replikację i stabilność plazmidu. Celem tego przeglądu jest aktualizacja i omówienie nowych informacji na temat (1) replikacji i utrzymania pBR322; (2) związanych z gospodarzem mechanizmów modulacji replikacji plazmidów; (3) wpływ tempa wzrostu na kontrolę replikacji, stabilność i ekspresję rekombinowanego genu; (4) sposoby amplifikacji i eliminacji plazmidu. Na koniec (5) przedstawiono podsumowanie nowych badań pomocniczych dotyczących pBR322.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.