zpět k základům: pbr322 a systémy exprese proteinů v E. coli

rozsáhlá rozmanitost expresních systémů na bázi plazmidů v E. coli vyplynula ze skutečnosti, že neexistuje jednotná strategie pro dosažení maximální exprese každého klonovaného genu. Ačkoli byla implementována řada strategií pro řešení problémů spojených s transkripcí a translací genů, skládáním proteinů, sekrecí, lokalizací, posttranslačními modifikacemi, zvláštnostmi různých kmenů a podobně a byly vyvinuty integrovanější procesy, základní prvky přenášené plazmidem a jejich interakce s konkrétním kmenem hostitele ovlivní celkový expresní systém a konečnou produktivitu. Plazmidový vektor pBR322 je dobře zavedený víceúčelový klonovací vektor v laboratořích po celém světě a velké množství derivátů bylo vytvořeno pro specifické aplikace a výzkumné účely, včetně genové exprese v jeho přirozeném hostiteli, E. coli a několika dalších bakteriích. Časná charakterizace molekuly, včetně její nukleotidové sekvence, replikačních a udržovacích mechanismů a stanovení jejích kódujících oblastí, představovala její úspěch nejen jako univerzální klonovací vektor, ale také jako poskytovatel genů a původ replikace pro jiné intraspeciální vektory. Od zveřejnění výše uvedených recenzí, v literatuře se objevily nové objevy týkající se těchto otázek, které prohlubují porozumění vlastnostem plazmidu, chování, a dopad v systémech genové exprese, stejně jako některé důležité charakteristiky kmene, které ovlivňují replikaci a stabilitu plazmidu. Cíle tohoto přezkumu zahrnují aktualizaci a diskusi o nových informacích o (1) replikaci a údržbě pBR322; (2) hostitelských modulačních mechanismech replikace plasmidu; (3) účinky rychlosti růstu na kontrolu replikace, stabilitu a expresi rekombinantního genu; (4) způsoby amplifikace a eliminace plazmidu. Konečně, (5) souhrn nových doplňkových studií o pBR322 je prezentován.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.